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在生物技術(shù)研究(抗體藥物開發(fā)、蛋白研究等)中，常常需要使用到穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建來提升蛋白高親和力和批次一致性。采用穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建能夠提供可靠的平臺(tái)，更是在生物制藥和基因治療等領(lǐng)域有著廣泛的使用。下面，普健生物具體和大家詳細(xì)介紹穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建。
那么，什么是穩(wěn)定細(xì)胞株呢?穩(wěn)定細(xì)胞株就是通過基因工程將外源基因引入到宿主細(xì)胞中，然后通過培養(yǎng)、篩選等重復(fù)操作，篩選出能夠重復(fù)制備目標(biāo)蛋白的細(xì)胞群體。
在穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的過程中，有兩項(xiàng)核心步驟需要特別注意，分別是宿主細(xì)胞的選擇以及表達(dá)載體的構(gòu)建，只有做好了這兩方面的工作，才能更好地進(jìn)行細(xì)胞株的構(gòu)建。
宿主細(xì)胞的選擇：常用的宿主細(xì)胞較多，比如CHO細(xì)胞、HEK細(xì)胞等，需要結(jié)合宿主細(xì)胞的生長特性、表達(dá)水平以及生產(chǎn)成本等綜合考慮;
表達(dá)載體的構(gòu)建：其實(shí)就是將目標(biāo)基因?qū)氲剿拗骷?xì)胞中的過程。常見的表達(dá)載體主要包含目標(biāo)基因、選擇基因、調(diào)控原件等，主要目的就是確保目的基因的穩(wěn)定表達(dá);
穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的方法主要有兩種：質(zhì)粒穩(wěn)定細(xì)胞系以及基因整合穩(wěn)定細(xì)胞系。
質(zhì)粒穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的流程如下：
1、宿主選擇。選擇合適的宿主來進(jìn)行進(jìn)一步的細(xì)胞株構(gòu)建;
2、載體構(gòu)建。通過質(zhì)粒來構(gòu)建載體;
3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞內(nèi);
4、細(xì)胞株篩選。通過培養(yǎng)及篩選，重復(fù)操作多次后，篩選出合適的細(xì)胞株;
基因組整合穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的流程如下：
1、選擇合適的細(xì)胞株。選擇出合適的細(xì)胞作為宿主;
2、構(gòu)建合適的載體。整合載體，將目標(biāo)基因整合到宿主中;
3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將構(gòu)建出來的載體導(dǎo)入到宿主細(xì)胞中;
4、篩選細(xì)胞系。通過標(biāo)記基因進(jìn)行細(xì)胞系的篩選和擴(kuò)增;
穩(wěn)定細(xì)胞株的優(yōu)勢(shì)：
1、實(shí)現(xiàn)持久表達(dá)。穩(wěn)定細(xì)胞株能夠長久且穩(wěn)定地表達(dá)目標(biāo)蛋白;
2、更高的可控性?？梢酝ㄟ^調(diào)控原件來時(shí)間對(duì)目的基因的調(diào)控;
3、實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。適合用于大規(guī)模生產(chǎn);
穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建在生物研究以及應(yīng)用上有著廣泛的應(yīng)用，因?yàn)槠淠軌驅(qū)崿F(xiàn)持久性表達(dá)，而且能夠?qū)崿F(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，使得其得到非常廣泛的使用。當(dāng)然了，因?yàn)槠浼夹g(shù)要求較高，而且制備周期非常的長，所以，對(duì)于一些蛋白制備續(xù)期來說，不適合使用。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。
