大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有遺傳背景清晰，培養(yǎng)周期短，易于放大生產(chǎn)，抗污染能力強(qiáng)等諸多優(yōu)點(diǎn)，是目前應(yīng)用最為廣泛的表達(dá)系統(tǒng)之一。普健生物經(jīng)過十多年的打磨，建立了3H(High through、High efficiency、High quality) 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，平臺的表達(dá)成功率大于95%;獨(dú)有的表達(dá)純化以及復(fù)性平臺，已成功交付上萬例大腸桿菌表達(dá)服務(wù)項(xiàng)目。
1. 普健生物具有十幾年的蛋白表達(dá)經(jīng)驗(yàn)，15臺中大型微生物培養(yǎng)搖床及發(fā)酵設(shè)備、12臺超聲破碎儀、中試型高壓均質(zhì)儀等配套設(shè)備，可以實(shí)現(xiàn)高通量，大規(guī)模大腸桿菌表達(dá)生產(chǎn)
2. 具有多種大腸桿菌表達(dá)載體pET系列、pGEX系列等;多種表達(dá)宿主：標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)菌株、可增強(qiáng)蛋白表達(dá)的菌株T7E、表達(dá)毒性蛋白的C41、增強(qiáng)蛋白可溶性表達(dá)的超低溫菌株Arctic、以及其它經(jīng)過AtaGenix優(yōu)化改造的菌株;通過不同載體和菌株的優(yōu)化組合，可以實(shí)現(xiàn)蛋白的高效表達(dá)，蛋白表達(dá)成功率超過95%
3. 普健生物具有完善的大腸桿菌表達(dá)、純化、內(nèi)毒素控制生產(chǎn)線，可以生產(chǎn)高質(zhì)量蛋白，用于細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)，動物實(shí)驗(yàn)等，滿足高質(zhì)量的蛋白使用需求
服務(wù)流程
大腸桿菌表達(dá)蛋白A
1.表達(dá)體系優(yōu)化：包括宿主菌、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)劑的濃度及培養(yǎng)基。
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宿主菌 |
誘導(dǎo)溫度 |
誘導(dǎo)時間 |
誘導(dǎo)劑 |
培養(yǎng)基 |
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T7E,BL21,C41,Arctic |
30℃/37℃ |
1h/4h |
IPTG |
LB/自誘導(dǎo)培養(yǎng)基 |
蛋白A的搖瓶表達(dá)量為8 mg/L, 隨后進(jìn)行了發(fā)酵條件的優(yōu)化，包括培養(yǎng)基成分的優(yōu)化、分批及補(bǔ)料的測試，70 L 分批發(fā)酵的表達(dá)量為60 mg/L。
2.3C酶去除蛋白MAT標(biāo)簽，具體結(jié)果如圖3、圖4所示
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