盤點大腸桿菌重組蛋白表達過程中的一些常見問題

　　大腸桿菌作為最早用來生產(chǎn)蛋白的一種方式，為我們的健康起到了非常大的作用。如果采用大腸桿菌來作為宿主生物，它具備生長快速、親公司那個實現(xiàn)以及外源DNA轉(zhuǎn)化快速等優(yōu)點，使得它的使用非常的廣泛。但是，我們?nèi)粘Ｔ诖竽c桿菌生產(chǎn)的過程中嘗嘗會遇到一些小問題，導(dǎo)致所產(chǎn)生的蛋白達不到我們的要求，今天，普健生物就在這里和大家具體聊聊大腸桿菌重組蛋白表達。

　　1、質(zhì)粒的選擇

　　我們常說的質(zhì)粒包括復(fù)制子、啟動子、選擇標(biāo)記、多個克隆位點等，因為需要選擇的選項比較多，而且表達載體的目錄比較大，所以，我們時常會出現(xiàn)選擇出錯的情況。這個時候，我們就需要根據(jù)個人的需求去仔細(xì)選擇，這樣才能避免相關(guān)問題的出現(xiàn);

　　2、復(fù)制子

　　復(fù)制子其實就是由一個復(fù)制起點和相應(yīng)的順式作用控制元件所組成，而我們?nèi)粘９ぷ髦邢胍x擇合適的載體時，最需要注意的一個重要參數(shù)就是基因拷貝數(shù)，而基因拷貝數(shù)的控制權(quán)則位于復(fù)制子中。高質(zhì)粒數(shù)量的復(fù)制子在極大程度上會造成代謝負(fù)擔(dān)的提升，可能會導(dǎo)致細(xì)菌的生長速度出現(xiàn)降低的現(xiàn)象，而且可能會造成質(zhì)粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象，最終導(dǎo)致用于蛋白合成的健康生物數(shù)量下降;

　　3、其他可能遇到的問題

　　雖然說現(xiàn)在可以通過一定的手段來實現(xiàn)在短期內(nèi)處理數(shù)百種蛋白，但是這項技術(shù)存在著一定的局限性，需要在后期的實驗中不斷改進。而且對于大部分的實驗室來說，自動化平臺相對昂貴，價格相對來說難以承受;

　　總的來說，大腸桿菌蛋白表達所具備的優(yōu)勢是無與倫比的，因為其周期短、操作簡單、失敗率低的情況，只要我們做好相應(yīng)的準(zhǔn)備工作，按照程序來設(shè)計，這樣就能在極大程度上降低其失敗的情況。更多蛋白表達的相關(guān)知識，敬請關(guān)注普健生物。