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畢赤酵母表達(dá)是原核表達(dá)中最常用的方法之一，因?yàn)槠溥z傳背景清晰、表達(dá)安全、制備成本低等優(yōu)點(diǎn)，使得在很多項(xiàng)目上都會(huì)優(yōu)先考慮。但是，如何讓這些耗材產(chǎn)生最大價(jià)值，那就是我們保存和培養(yǎng)的問題了。為什么大公司在成本上要比小公司更低?因除了因?yàn)榧夹g(shù)和儀器方面的原因外，對(duì)耗材的保存和培養(yǎng)也是很大的一個(gè)方面。
1、計(jì)算好酵母的倍增時(shí)間
據(jù)生物學(xué)統(tǒng)計(jì)，酵母的生長分裂會(huì)隨著一定的曲線來變化，通常一OD值來繪制。一般來說，酵母分裂曲線主要分為三個(gè)時(shí)期：延滯期、對(duì)數(shù)生長期以及穩(wěn)定期，在對(duì)數(shù)期時(shí)，細(xì)胞分裂旺盛且細(xì)胞數(shù)目倍增。這個(gè)時(shí)候，我們需要主要補(bǔ)充營養(yǎng)，一旦營養(yǎng)耗盡，細(xì)胞分裂減緩，則會(huì)進(jìn)入穩(wěn)定期。所以，了解本增時(shí)間，能夠很好地讓我們安排實(shí)驗(yàn)進(jìn)程;
2、制備培養(yǎng)基
了解好OD圖后，我們就需要進(jìn)行酵母菌的培養(yǎng)工作了。酵母的主要糧食是：酵母提取物(去除細(xì)胞壁的細(xì)胞成分)、蛋白胨以及糖分。培養(yǎng)基則是將酵母提取物和蛋白胨溶解于水中之后，通過高壓滅菌后，倒入到平板中，凝固后即是我們所需的培養(yǎng)基;
3、酵母的培養(yǎng)
將酵母細(xì)胞種到小體積的培養(yǎng)基中，并在30度的搖床或旋轉(zhuǎn)器上培養(yǎng)48小時(shí)。當(dāng)然了，對(duì)于大規(guī)模培養(yǎng)如上的方式就不適合了，需要先確定酵母培養(yǎng)物的OD值，然后將其稀釋到起始OD值的0.1-0.2倍，然后再放到30度搖床上培養(yǎng)到所要的OD值;
4、酵母的存儲(chǔ)
平板培養(yǎng)可將培養(yǎng)基放置于4度環(huán)境下保存3個(gè)月，如果要得到新鮮培養(yǎng)物，則需要在新鮮培養(yǎng)基上重新規(guī)劃細(xì)胞。對(duì)于需要長期保存的酵母菌來說，可將其分別培養(yǎng)在不同的甘油管中，冷凍保存。一般來說，-80度環(huán)境下可以保存幾年;
酵母的健康可以或直接關(guān)系到我們后期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，以及能否表達(dá)出我們想要的蛋白產(chǎn)品。如果這些工作做好了，不僅能更好地滿足我們的實(shí)驗(yàn)需求，而且能夠在極大程度上降低實(shí)驗(yàn)成本。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供酵母蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。
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