穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建方式及其注意要點(diǎn)

　　在很多實(shí)驗(yàn)過程中我們都需要用到穩(wěn)定細(xì)胞系，只是因?yàn)槠錁?gòu)建時(shí)間長、構(gòu)建成功率低，使得大家放棄這個(gè)方法。構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株往往耗時(shí)半年以上，別人的實(shí)驗(yàn)都收尾了，而這邊卻一點(diǎn)動(dòng)靜都沒有，可以說，其中耗費(fèi)的精力足夠?qū)懸黄獪I史了。那么，如何構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。

　　首先，我們需要知道，在什么情況下，需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株。

　　1、長期目的細(xì)胞研究時(shí)。一些細(xì)胞需要長期研究，通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株可以降低細(xì)胞變異率，極大程度上方便了實(shí)驗(yàn)研究;

　　2、蛋白半衰期時(shí)間長時(shí)。當(dāng)?shù)鞍装胨テ陂L時(shí)，瞬時(shí)RNA就只能通過干擾表達(dá)，但是卻無法去除已經(jīng)表達(dá)的蛋白，通過穩(wěn)定細(xì)胞株則可以更輕松實(shí)現(xiàn);

　　3、高拷貝數(shù)表達(dá)需求時(shí)。這個(gè)時(shí)候會因?yàn)橐恍┤藶樵驅(qū)е陆Y(jié)果不準(zhǔn)確;

　　4、需要誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)。主要是一些致死基因或者是需要空表達(dá)的;

　　5、需要用到細(xì)胞時(shí)。比如裸鼠成瘤時(shí);

　　那么，如何構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株呢?其具體原理是怎樣的?

　　其實(shí)就是通過將外源DNA/RNA克隆到具有某種抗性基因的載體上，重組載體被轉(zhuǎn)染之宿主細(xì)胞并整合到染色體中，能夠隨著細(xì)胞分裂而穩(wěn)定地傳代下去;

　　構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株有哪些方面需要注意的?

　　穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建是一個(gè)長期過程，從質(zhì)粒包裝到慢病毒包裝，再到細(xì)胞感染以及篩選等等過程，每一步都至關(guān)重要。往往會因?yàn)橐恍┬〉氖д`，導(dǎo)致半年時(shí)間浪費(fèi)掉的現(xiàn)象也不少見，所以，細(xì)節(jié)方面一定要嚴(yán)格把控;

　　對于一些小公司來說，穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建可謂得不償失，但是對于長期發(fā)展來說，穩(wěn)定細(xì)胞株可以說是一項(xiàng)必不可少的技術(shù)。相對于一般的蛋白制備手段來說，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建不僅能有效減少批次之間的差異問題，更是能在極大程度上保證蛋白抗體的活性一致性。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。