采用真核表達系統(tǒng)表達蛋白時如何做好蛋白純化?

　　真核蛋白表達系統(tǒng)是我們比較常用的一種蛋白表達方式，它一般采用酵母、昆蟲、哺乳動物來進行表達，所產(chǎn)生的蛋白和靶DNA具備高度的相似性，能夠誘導高效表達。但是其在實驗過程中的可誘導性、生物利用率、劑量依賴性等方面有著較高的要求，所以，日常使用中需要權(quán)衡利弊后再來選擇。那么，在真核蛋白表達時，我們?nèi)绾芜M行蛋白純化呢?

　　其實我們知道，無論是原核表達還是真核表達都需要進行蛋白純化，這樣才能提升蛋白的作用效果，使其達到我們的使用需求。所以，蛋白純化，是蛋白表達過程中非常重要的一個環(huán)節(jié)。

　　天然大分子蛋白純化：

　　通過蛋白特性，選擇合適孔徑的分子篩進行純化，同時搭配陰離子柱或陽離子柱，可以獲得純度高達95%的蛋白;

　　天然小分子分離純化：

　　通過分子篩過濾掉大部分的大分子，然后再使用大孔樹脂或反向樹脂純化小分子化合物，再通過HPLC和MS對小分子肽進行篩選即可;

　　未知蛋白純化：

　　結(jié)合客戶提供的蛋白特性，選擇相對應的方法，最后采用質(zhì)譜鑒定，看是否滿足用戶的需求。一般來說，對于這種未知的蛋白質(zhì)，我們所采用的方法也不外乎如上兩種，或者結(jié)合使用的方式;

　　真核蛋白純化前客戶需要提供哪些支持?

　　1、基因序列。為了更好地制備蛋白，客戶需要提供準確的基因序列，并告知蛋白標簽及相關(guān)要求，同時告知蛋白的用途(一般來說，制備的蛋白僅供研發(fā)使用，不適用于臨床使用);

　　2、提供質(zhì)粒?？蛻粜杼峁┵|(zhì)粒，且量不小于100ng，同時提供序列文件;

　　3、根據(jù)實驗要求，蛋白序列、分子量、等電點等信息;

　　真核蛋白表達系統(tǒng)雖然說獲得的蛋白特性更強、效果更好，但是相關(guān)投入以及技術(shù)需求就不是原核蛋白表達系統(tǒng)所能比擬的。當然了，在蛋白制備完成后，所用的蛋白純化方法較為類似，可以采用類似的方法。普健生物專業(yè)為您提供真核蛋白表達及蛋白純化服務，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。