采用雜交瘤技術(shù)制備抗體的原理及其具體過程

　　雜交瘤技術(shù)也叫做單克隆抗體技術(shù)，它是一種在細(xì)胞融合技術(shù)上發(fā)展起來的抗體制備技術(shù)。雜交瘤細(xì)胞技術(shù)通過將骨髓瘤細(xì)胞與免疫的動(dòng)物脾細(xì)胞相融合，從而形成能夠無限增殖且可以生產(chǎn)單克隆抗體的細(xì)胞。那么，您對(duì)雜交瘤細(xì)胞抗體制備技術(shù)了解多少呢?今天普健生物在這里和大家具體聊聊。

　　雜交瘤細(xì)胞制備的主要步驟：

　　1、細(xì)胞的選擇與細(xì)胞融合

　　特異性抗體制備的一方必須是免疫后的B細(xì)胞，通常情況下，我們都會(huì)選擇面以后的動(dòng)物脾細(xì)胞，因?yàn)槠⑹荁細(xì)胞的主要匯聚場(chǎng)所，只要發(fā)生免疫反應(yīng)，脾臟中就一定會(huì)出現(xiàn)免疫應(yīng)答。融合細(xì)胞的另外一方通常選擇骨髓瘤細(xì)胞，因?yàn)樾枰鋼碛胁粩喾敝车奶匦浴?/p>

　　通常情況下，我們都會(huì)選擇細(xì)胞融合劑來進(jìn)行細(xì)胞的融合，它會(huì)對(duì)細(xì)胞膜造成一定的損傷，也使得細(xì)胞更加容易粘連在一起。一般來說，我們會(huì)選擇聚乙二醇來充當(dāng)細(xì)胞融合劑，在40%的濃度下，其能夠最低程度上對(duì)細(xì)胞造成損傷，同時(shí)又能產(chǎn)生最高頻的融合;

　　2、細(xì)胞培養(yǎng)

　　細(xì)胞融合是一個(gè)物理過程，在融合的過程中會(huì)出現(xiàn)呈現(xiàn)出各種樣式，比如脾-瘤細(xì)胞、脾-脾細(xì)胞、瘤-瘤細(xì)胞等。但是，正常的脾細(xì)胞在培養(yǎng)基中僅能存活5-7天，細(xì)胞多聚體也容易死去，所以，我們僅需將瘤細(xì)胞去除即可。而后，在對(duì)剩余的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得我們所需細(xì)胞;

　　3、特異性抗體篩選

　　因?yàn)榧?xì)胞的融合是一個(gè)隨機(jī)的過程，所以，我們需要有針對(duì)性地對(duì)其進(jìn)行篩選清除。一般來說，篩選分為兩步：第一步是對(duì)融合細(xì)胞的抗體進(jìn)行篩選，第二步是對(duì)抗體進(jìn)行特異性篩選。一般來說，我們可以對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行稀釋，均勻分為到培養(yǎng)板的每個(gè)孔中，培養(yǎng)后取上清液用ELISA法選出高分泌性的細(xì)胞(也就是我們常說的克隆)。而后，對(duì)這些細(xì)胞再次進(jìn)行克隆化，找出其中陽性細(xì)胞株，擴(kuò)增后再進(jìn)行凍存、培養(yǎng)等操作;

　　當(dāng)然了，雜交瘤細(xì)胞抗體篩選的過程更加地復(fù)雜，而且其中涉及到很多精細(xì)化操作，需要專業(yè)技術(shù)的人員進(jìn)行操作。而且有很多細(xì)節(jié)方面的工作需要引起注意，否則，很容易造成雜交瘤細(xì)胞融合不成功的現(xiàn)象。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供雜交瘤細(xì)胞抗體制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。