盤點(diǎn)昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)中的一些常見問題

　　對(duì)于新手來說，昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)中常常會(huì)遇到各種各樣的問題，這些問題在看前輩們做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候完全感覺不到，可是當(dāng)自己親自操作的時(shí)候，往往就會(huì)浮現(xiàn)。那么，昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)中一般會(huì)遇到哪些問題呢?今天普健生物就和大家具體聊聊。

　　1、哪類蛋白適合選擇昆蟲蛋白表達(dá)?

　　對(duì)于一些表達(dá)相對(duì)困難的蛋白都可以考慮用昆蟲來表達(dá)，比如：激酶、昆蟲來源蛋白、糖蛋白、衣殼蛋白、膜蛋白等;

　　2、昆蟲蛋白表達(dá)是用昆蟲嗎?

　　昆蟲表達(dá)并非用昆蟲來表達(dá)，而是通過培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞，用細(xì)胞來表達(dá)蛋白;

　　3、目的基因是否整合到昆蟲細(xì)胞基因中?

　　昆蟲表達(dá)并不會(huì)將目的基因整合到昆蟲基因中，而是在特定的條件下，用桿狀病毒攜帶目的基因去侵染昆蟲細(xì)胞，而后利用宿主的環(huán)境進(jìn)行自我復(fù)制，從而獲得相應(yīng)蛋白;

　　4、昆蟲蛋白表達(dá)是否對(duì)蛋白大小有要求?

　　對(duì)于大小在10kd-100kd的蛋白適合于任何表達(dá)系統(tǒng)，110dk-250kd這類大蛋白則首選昆蟲表達(dá)系統(tǒng);

　　5、衣殼蛋白表達(dá)后如何純化?

　　一般來說，衣殼蛋白都較難純化，主要是因?yàn)槠淇扇苄圆缓?、不掛柱、容易形成聚合體等問題。我們通常會(huì)采用多種純化方式來進(jìn)行綜合提純，這樣才能在一定程度上達(dá)到純化的目的;

　　6、目的蛋白表達(dá)后會(huì)和病毒一起釋放出來嗎?

　　目的蛋白是否會(huì)釋放到細(xì)胞外主要由蛋白的特性決定，當(dāng)然了，信號(hào)肽也在一定程度上有著一定的影響，一般來說，蛋白都會(huì)釋放到細(xì)胞外。當(dāng)然了，有一些特殊情況，需要特殊對(duì)待;

　　7、如何保存蛋白?

　　一般來說，為了保護(hù)其中的病毒，我們需要加入2%培養(yǎng)基級(jí)別的BS或胎牛血清，在4度或負(fù)80度的環(huán)境中保存;

　　事實(shí)上能夠影響到蛋白特性的因素有很多，而且不同的蛋白所需環(huán)境也是各不相同的。所以，我們?cè)谶M(jìn)行相關(guān)蛋白實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，需要結(jié)合實(shí)際情況來進(jìn)行選擇。武漢普健生物作為一家專業(yè)的蛋白制備公司，專業(yè)為廣大用戶提供昆蟲蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。