聯(lián)系我們
桿狀病毒昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)(Baculovirus Expression Vector System, BEVS)是一種以昆蟲(chóng)細(xì)胞為宿主細(xì)胞，依托桿狀病毒為外源基因載體，從而實(shí)現(xiàn)外源基因表達(dá)的表達(dá)系統(tǒng)。在生物制備領(lǐng)域中，昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是一種強(qiáng)大的工具。
桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的制備流程：
1、質(zhì)粒構(gòu)建。將提取出的目的基因插入到桿狀病毒基因中(主要是線性或環(huán)狀的DNA質(zhì)粒);
2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到選定昆蟲(chóng)細(xì)胞中，使得目標(biāo)基因得以表達(dá);
3、蛋白表達(dá)。對(duì)所得細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使得目標(biāo)基因得以轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的表達(dá);
4、蛋白包裝。將病毒顆粒釋放到培養(yǎng)基中，從而獲得以及純化所需目的蛋白;
桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的常用方法：
1、轉(zhuǎn)染方法。轉(zhuǎn)染的方法很多，比如鈣磷沉淀法、電穿孔法等;
2、標(biāo)記方法。利用對(duì)表達(dá)載體進(jìn)行標(biāo)記，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的篩選;
桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)：
1、安全性高。因?yàn)橹苽溥^(guò)程中僅采用桿狀病毒來(lái)轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞，不會(huì)感染到其他細(xì)胞，所以不會(huì)對(duì)人體造成影響;
2、表達(dá)高效。通過(guò)各種酶的使用，使得蛋白得以正確折疊以及翻譯后修飾，從而實(shí)現(xiàn)復(fù)雜蛋白的表達(dá);
3、適合大規(guī)模生產(chǎn)。昆蟲(chóng)細(xì)胞可以在無(wú)血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn);
4、應(yīng)用廣泛。在蛋白功能研究、藥物發(fā)現(xiàn)研究等方面有著廣泛的使用;
桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的局限性：
1、表達(dá)不穩(wěn)定。因?yàn)椴《敬嬖谝欢ǖ亩拘?，其?huì)造成宿主細(xì)胞的裂解，從而影響蛋白的穩(wěn)定性;
2、糖基化水平低。當(dāng)我們對(duì)蛋白進(jìn)行糖基化時(shí)，可能會(huì)造成單的不穩(wěn)定以及免疫原性;
3、基因組不穩(wěn)定。桿狀病毒基因組會(huì)存在一定的不穩(wěn)定性，從而影響到蛋白的長(zhǎng)期表達(dá)和穩(wěn)定性;
桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的注意事項(xiàng)：
1、需要選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)。結(jié)合目的蛋白的性質(zhì)來(lái)選擇合適的表達(dá)載體，從而確保載體與目的基因的相容性;
2、對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。對(duì)于不同的昆蟲(chóng)細(xì)胞，需要結(jié)合其感染以及培養(yǎng)條件，選擇最優(yōu)的培養(yǎng)條件;
3、對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行合理地設(shè)計(jì)。相對(duì)其他表達(dá)系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)存在一定的復(fù)雜性，需要對(duì)其實(shí)驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行合理地設(shè)計(jì);
桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)存在著極大的優(yōu)勢(shì)，不僅高效，而且在蛋白修飾方面有著極大的優(yōu)勢(shì)，為生物學(xué)以及制備領(lǐng)域研究有著極大的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)對(duì)其原理以及流程、操作等方面的調(diào)整，能夠更好地實(shí)現(xiàn)蛋白的表達(dá)。當(dāng)然了，這套蛋白表達(dá)系統(tǒng)也存在著一定的不足之處，需要結(jié)合具體的情況來(lái)進(jìn)行選擇。更多蛋白表達(dá)的相關(guān)知識(shí)，敬請(qǐng)關(guān)注武漢普健生物。
