關(guān)于真核蛋白表達(dá)系統(tǒng)您了解多少?

　　真核蛋白表達(dá)技術(shù)是是一種在生物藥品制備以及生物研究領(lǐng)域有著廣泛使用的蛋白技術(shù)，通過將外源基因轉(zhuǎn)染之真核細(xì)胞中，使得目標(biāo)蛋白得以表達(dá)。相比原核表達(dá)系統(tǒng)來說，真核蛋白表達(dá)系統(tǒng)能夠更好地進(jìn)行折疊以及翻譯后修飾工作，更適合于表達(dá)那些功能性更強(qiáng)的蛋白。

　　真核蛋白表達(dá)的原理：

　　真核蛋白表達(dá)的原理是通過技術(shù)手段將外源基因?qū)氲秸婧思?xì)胞內(nèi)，利用宿主細(xì)胞的生物機(jī)制合成目標(biāo)蛋白的過程。通過基因克隆、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)錄后翻譯、翻譯后修飾、蛋白純化、蛋白分析等一系列的手段來實(shí)現(xiàn)蛋白表達(dá);

　　真核蛋白表達(dá)的流程：

　　1、基因克隆。將目標(biāo)基因克隆到真核表達(dá)載體中，當(dāng)然了，根據(jù)需求進(jìn)行啟動子、標(biāo)記以及調(diào)控元件等元件的選擇;

　　2、細(xì)胞培養(yǎng)。將所得載體轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞中，而后再通過細(xì)胞培養(yǎng)，使得其具備蛋白表達(dá)的能力;

　　3、細(xì)胞篩選。從所得細(xì)胞中篩選出能夠正常表達(dá)目標(biāo)蛋白的細(xì)胞，并通過細(xì)胞裂解來獲得目的蛋白;

　　4、蛋白純化。通過層析、透析、離心、沉淀等一系列的手段提升目的蛋白的純度;

　　常用的真核蛋白表達(dá)方法：

　　1、哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)。采用哺乳動物細(xì)胞為載體表達(dá)蛋白，適合大規(guī)模表達(dá)復(fù)雜蛋白;

　　2、昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。采用桿狀病毒攜帶目的基因轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞的方式來表達(dá)蛋白，適合一些較為簡單的真核蛋白表達(dá)，具備制備成本低、操作簡單等方式;

　　3、酵母表達(dá)系統(tǒng)。采用酵母細(xì)菌表達(dá)目標(biāo)蛋白的方式，適合于表達(dá)一些中等規(guī)模的蛋白，對于那些較大規(guī)模以及高密度表達(dá)的蛋白;

　　綜上所述，我們需要結(jié)合蛋白的性質(zhì)和需求來選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，通過對培養(yǎng)條件、轉(zhuǎn)染條件等方式來提升蛋白的表達(dá)效率。當(dāng)然了，我們在進(jìn)行蛋白表達(dá)過程中，需要選擇合適的蛋白純化方法，避免對蛋白造成影響。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供真核蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。