重組蛋白表達(dá)之細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理及問題解析

　　在重組蛋白表達(dá)時，我們常常通過將外源基因?qū)氲郊?xì)胞內(nèi)，讓其隨著細(xì)胞蛋白的表達(dá)而表達(dá)，從而獲得目標(biāo)蛋白的方式。這個過程，我們稱之為細(xì)胞轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)現(xiàn)過程有很多，比如化學(xué)轉(zhuǎn)染法、物理轉(zhuǎn)染法、生物轉(zhuǎn)染法等等?？梢哉f，細(xì)胞轉(zhuǎn)染是實(shí)現(xiàn)基因編輯、蛋白表達(dá)、信號傳導(dǎo)等一系列研究的重要方法。

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染現(xiàn)階段主要有兩種：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染(關(guān)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染的相關(guān)知識以及穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的步驟，大家可以點(diǎn)擊“哺乳動物蛋白表達(dá)瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染之間有哪些不同?”查看)。

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常見問題有哪些?

　　1、哪些因素會影響到細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率

　　質(zhì)粒。質(zhì)粒的選擇從直接上關(guān)系到轉(zhuǎn)染的效率，其濃度也會在極大程度上影響著轉(zhuǎn)染的效率(一般不要低于1000ng/uL);

　　細(xì)胞。首先要保證所選是一個活性較高的細(xì)胞，對于不同的細(xì)胞來說，轉(zhuǎn)染方法和試劑的選擇不同，轉(zhuǎn)染的效率也會存在極大的差異;

　　方法。按照說明書來選擇合適的轉(zhuǎn)染方法，并確定好最佳的轉(zhuǎn)染條件;

　　2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染無法提高轉(zhuǎn)染率要怎么解決

　　當(dāng)出現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的情況時，可以選通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株的方式，或者通過藥物的加壓篩選來進(jìn)行，這樣一般都能解決轉(zhuǎn)染效率低的情況;

　　3、怎么選擇合適的細(xì)胞轉(zhuǎn)染

　　目前常用的轉(zhuǎn)染方法主要有物理轉(zhuǎn)染法以及化學(xué)試劑等轉(zhuǎn)染方法，但是也各具優(yōu)缺點(diǎn)。比如物理轉(zhuǎn)染法需要使用到一些昂貴的儀器，一般的實(shí)驗(yàn)室無法滿足這些要求;而化學(xué)轉(zhuǎn)染法使用相對更加廣泛，價(jià)格便宜、操作簡單，但是只能用于一些較為常規(guī)的細(xì)胞，對于一些個性化的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率則會相對低下;

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染作為外源基因的引入方式，可以說在直接上關(guān)系著蛋白表達(dá)的效率或成功率，可以說是蛋白表達(dá)成功的第一步。所以，如何選擇載體并構(gòu)建好合適的轉(zhuǎn)染環(huán)境，在極大程度上制約著蛋白的表達(dá)。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。