如何在大腸桿菌表達系統(tǒng)中實現高通量表達

　　在生物技術發(fā)展的今天，蛋白表達在科學研究以及臨床治療中起著非常重要的作用。而在基因技術發(fā)展的今天，蛋白的需求日益增加，大腸桿菌表達系統(tǒng)因為其遺傳背景清晰、成本低以及生長迅速的優(yōu)勢，使得其成為重組蛋白表達的首選。

　　什么是高通量蛋白表達技術?

　　高通量蛋白表達技術其實就是一種能夠實現大規(guī)模、高效的制備蛋白的技術，可以通過不同的方法來實現目標蛋白的表達。

　　高通量蛋白表達的步驟有哪些?

　　1、目的基因制備

　　作為蛋白表達，基因制備是第一步。目的基因的提取方法有很多，傳統(tǒng)的方法主要是通過從cDNA文庫中提取。但是，這種方法存在一定的局限性，費時費力，而且難以添加融合標簽。現階段常用的方法主要采用PCR技術，設計好引物后，即可在PCR儀中完成目的基因的提取;

　　2、高通量表達系統(tǒng)構建

　　和傳統(tǒng)的蛋白表達系統(tǒng)構建相似，高通量蛋白表達系統(tǒng)的構建沒有特別大的改動，只是說在一些細節(jié)方面有著一定的不同。比如在目的基因轉錄和表達之前需要添加融合標簽，以便于提升其表達效率;

　　3、菌株培養(yǎng)

　　在表達系統(tǒng)構建成功后(一般來說，我們會選擇大腸桿菌菌株來進行表達)，而后選擇出合適的菌株。當然了，對于大腸桿菌的培養(yǎng)來說，我們盡量選擇分批培養(yǎng)，這樣才更加有利于菌株的控制;

　　4、高通量蛋白表達及純化

　　采用高通量的平臺，能夠實現迅速地進行基因克隆、挑選菌落、質粒分離、蛋白表達以及蛋白純化等操作。當然了，雖然說這個平臺的構建相對困難，但是，對于那些復雜的分子實驗來說，往往能提供極大的便利;

　　采用大腸桿菌表達系統(tǒng)來實現高通量重組蛋白的表達，能夠在極大程度上推進蛋白的表達進程。雖然說在其技術水平上有著一定的要求，但是隨著技術的不斷優(yōu)化和創(chuàng)新，能夠讓其更加高效且可靠的進行蛋白表達。