盤點原核蛋白表達(dá)中常見的五大問題

　　原核蛋白表達(dá)是現(xiàn)階段較為常用的蛋白表達(dá)方式之一，因為其遺傳背景清晰、細(xì)胞增殖快、蛋白表達(dá)量高、穩(wěn)定性好等特點，使得其在蛋白表達(dá)中極為常用。但是，很多人在采用原核蛋白棒表達(dá)的時候，常常會出現(xiàn)蛋白無法表達(dá)的情況。有鑒于此，普健生物在這里和大家聊聊有關(guān)原核蛋白表達(dá)中常見的幾大問題。

　　1、不知道蛋白的特性及其結(jié)構(gòu)

　　當(dāng)我們不知道蛋白結(jié)構(gòu)和特性的時候，我們可以先確定一下這個蛋白是否有人研究過，是不是新發(fā)現(xiàn)的蛋白。如果有人研究過，則可以直接查詢相關(guān)文獻(xiàn)，而后采用軟件來測序。如果沒人研究過，則可以考慮先測試部分氨基酸，而后再設(shè)計引物克隆;

　　2、如何選擇宿主菌

　　原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)的密碼子偏愛性不同，所以，不能直接用真核表達(dá)的密碼子。如果蛋白不表達(dá)，則可能是因為蛋白為毒蛋白，或序列中有稀有密碼子;

　　3、測序正確但是蛋白無法表達(dá)

　　解析一下稀有密碼子，如果較多，則需要采取其他辦法。也可能是基因本身的問題，或者表達(dá)量過低的情況;

　　4、細(xì)胞為什么會停止生長

　　通常情況下，如果細(xì)胞停止生長，那么可能就會造成克隆能力大大降低，但是卻不會死亡。我們可以用菌落的形成來檢測表達(dá)系統(tǒng)的性能;

　　5、表達(dá)量和可溶性低的原因

　　一般來說，原核表達(dá)和可溶性的不同和很多方面有著關(guān)系，比如蛋白合成速率、密碼子優(yōu)化、表達(dá)溫度以及誘導(dǎo)條件優(yōu)化等，只有做好這些方面的工作，才能更好的促進(jìn)蛋白的表達(dá)和可溶性;

　　當(dāng)然了，在原核蛋白表達(dá)過程中可能會遇到各種各樣的問題，相對來說，都是因為日常操作中的一些細(xì)節(jié)操作方面的問題，一般只要注意到了，問題都不會很大。而且在原核表達(dá)中控制好相應(yīng)的外部環(huán)境問題，能夠在更大程度上保證蛋白的表達(dá)。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。