為什么在進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建時(shí)會(huì)這么困難?

　　穩(wěn)定細(xì)胞株是一種用于大量且穩(wěn)定表達(dá)蛋白的一種方式，不僅可以表達(dá)蛋白，而且還能進(jìn)行相關(guān)藥物篩選以及基因表達(dá)，使用范圍非常的廣泛。但是，對(duì)于很多企業(yè)來說，都不會(huì)選擇通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來表達(dá)蛋白，因?yàn)閷?duì)于他們來說，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建非常的困難，性價(jià)比相對(duì)較低。為什么穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建這么困難呢?下面，普健生物和大家具體聊聊。

　　我們知道，外源基因的表達(dá)主要采用兩種方式，一種是瞬時(shí)表達(dá)，另外一種是穩(wěn)定表達(dá)。

　　瞬時(shí)表達(dá)：將外源DNA克隆到質(zhì)粒中，而非將其整合到宿主細(xì)胞的染色體中。瞬時(shí)表達(dá)能夠迅速實(shí)現(xiàn)蛋白的表達(dá)，但是也只能持續(xù)幾天。瞬時(shí)表達(dá)的穩(wěn)定性相對(duì)較差，而且在不同實(shí)驗(yàn)中差異性較大，且無法長(zhǎng)久;

　　穩(wěn)定表達(dá)：直接將外源DNA整合到宿主細(xì)胞的染色體中，通過細(xì)胞篩選的方式，實(shí)現(xiàn)宿主細(xì)胞長(zhǎng)期表達(dá)目的蛋白的方式;

　　但是，問題出現(xiàn)了。想要將外源基因整合到宿主細(xì)胞的染色體中相對(duì)困難，成功率非常的低，通常會(huì)發(fā)生隨機(jī)整合，表達(dá)水平會(huì)受到整合位置、周圍染色體原件等因素的影響。所以，如果我們想要獲得能夠進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)，則需要進(jìn)行大量的篩選工作。

　　什么情況下需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株?

　　1、對(duì)于那些需要長(zhǎng)期研究的目標(biāo)細(xì)胞來說，可以通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來實(shí)現(xiàn);

　　2、對(duì)于一些半衰期極長(zhǎng)，盡可以通過RNA干擾卻無法表達(dá)的蛋白，只有通過穩(wěn)定細(xì)胞株來實(shí)現(xiàn);

　　3、對(duì)于那些無法進(jìn)行精確表達(dá)的細(xì)胞;

　　4、需要用到細(xì)胞的;

　　穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建要點(diǎn)有哪些?

　　穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建是一個(gè)長(zhǎng)期的過程，所以，從質(zhì)粒構(gòu)建、病毒包裝、細(xì)胞感染以到細(xì)胞篩選等過程，都需要引起注意，因?yàn)槿魏我粋€(gè)細(xì)節(jié)方面的錯(cuò)誤都可能造成耗時(shí)大半年的項(xiàng)目付諸流水。

　　穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建能夠在極大程度上解決蛋白穩(wěn)定表達(dá)的問題，對(duì)于一些需要長(zhǎng)期制備或者需要進(jìn)行細(xì)胞的長(zhǎng)期研究時(shí)，都可以通過穩(wěn)定細(xì)胞株來解決。當(dāng)然了，對(duì)于穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建，除了需要相關(guān)技術(shù)支持外，還需要有精細(xì)且細(xì)節(jié)方面的操作，只有在各個(gè)方面做好了，才能在更大程度上保證其構(gòu)建成功。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。