穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建過程中的一些常見問題盤點

　　為了能夠?qū)崿F(xiàn)蛋白的大規(guī)模生產(chǎn)，我們通常會選擇通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株的方式來實現(xiàn)。當(dāng)然了，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建的過程相對來說復(fù)雜，而且中間會因為很多原因造成構(gòu)建失敗。有鑒于此，普健生物專業(yè)為大家盤點一下有關(guān)穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建過程中的常見問題。

　　1、是否需要進(jìn)行密碼子優(yōu)化

　　因為密碼子種類多樣、數(shù)量差異等問題，所以，密碼子優(yōu)化對穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建有著很大的作用，能夠大幅度提高目標(biāo)蛋白的表達(dá)量;

　　2、如何選擇合適的啟動子

　　對于大部分的啟動子來說，使用得當(dāng)都能在大多數(shù)細(xì)胞中獲得高表達(dá)性。CMV、EF1A、CAG、CBh、SFFV等都屬于強(qiáng)啟動子，可以作為穩(wěn)定細(xì)胞株的啟動子;

　　3、穩(wěn)定細(xì)胞系培養(yǎng)體系

　　構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系時一般建議使用版抗性篩選濃度來維持細(xì)胞生長，可添加葡萄糖來調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝水平，維持細(xì)胞增殖;

　　4、標(biāo)簽是放N端還是C端

　　這個需要結(jié)合實際情況來選擇，如果信號肽在N端，則將標(biāo)簽放在C端;蛋白較小也放C端，純化中需要酶切標(biāo)簽則推薦放N端;

　　5、是否需要構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)敲除的細(xì)胞系

　　一般來說，我們不建議敲除元件穩(wěn)定持續(xù)的表達(dá)在細(xì)胞中，因為這個操作會在很大程度上影響細(xì)胞的狀態(tài);

　　穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建一般使用在蛋白大規(guī)模生產(chǎn)時，在構(gòu)建過程中需要注意的問題也不止如上幾樣，各個方面的細(xì)節(jié)操作也需要引起注意，而且需要有相應(yīng)的技術(shù)支持。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。