穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建方法及其構(gòu)建注意要點(diǎn)

　　在生物實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)诤芏鄷r(shí)候都要用到穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建技術(shù)，但是如果采用質(zhì)粒建系的話，不僅時(shí)間長(zhǎng)，而且成功率低，可能耗時(shí)半年都不一定能得到想要的結(jié)果。那么，怎么才能穩(wěn)定構(gòu)建細(xì)胞系，并獲得較好的結(jié)果呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。

　　穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，其實(shí)是相對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染來(lái)說(shuō)的，就是將進(jìn)入細(xì)胞中的質(zhì)粒整合到細(xì)胞基因組中去，讓其隨著細(xì)胞的分類而不斷遺傳下去的方式。而瞬時(shí)轉(zhuǎn)染則會(huì)因?yàn)檎匣虻母怕史浅５投杂坞x的形式存在。

　　什么時(shí)候需要使用到穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建呢?

　　1、需長(zhǎng)期研究目的蛋白時(shí)。對(duì)于那些需要長(zhǎng)期研究的目的蛋白來(lái)說(shuō)，不能存在太大的批次差，否則會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)的情況，這個(gè)時(shí)候就需要構(gòu)建細(xì)胞株來(lái)保證蛋白批次相同;

　　2、目的蛋白半衰期長(zhǎng)時(shí)。對(duì)于一些半衰期較長(zhǎng)的目的蛋白來(lái)說(shuō)，瞬時(shí)RNA只能達(dá)到干擾表達(dá)的目的，卻無(wú)法去除蛋白，這個(gè)還是可以用穩(wěn)定細(xì)胞株來(lái)實(shí)現(xiàn);

　　3、需極高拷貝數(shù)表達(dá)時(shí)。目的蛋白需要極高的拷貝數(shù)時(shí)，往往會(huì)因?yàn)橐恍┱J(rèn)為的因素而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確的情況，這個(gè)時(shí)候，就需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來(lái)幫助實(shí)驗(yàn)研究;

　　4、需用到誘導(dǎo)表達(dá)系時(shí)。主要針對(duì)一些致死基因或時(shí)空表達(dá)的情況;

　　5、需要使用到細(xì)胞時(shí)。比如裸鼠成瘤等atagenix;

　　構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株有哪些要點(diǎn)?

　　我們知道，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建是一個(gè)長(zhǎng)期的過(guò)程，無(wú)論是質(zhì)粒構(gòu)建，還是慢病毒包裝，以及細(xì)胞轉(zhuǎn)染和篩選，任何一個(gè)步驟都是至關(guān)重要的。甚至有的時(shí)候一個(gè)細(xì)胞株的構(gòu)建就需要耗費(fèi)半年的時(shí)間，只要一個(gè)步驟出錯(cuò)，就會(huì)造成實(shí)驗(yàn)的失敗。所以，除了注意各個(gè)步驟外，我們還需要做好如下三點(diǎn)：

　　1、優(yōu)良的細(xì)胞種子。

　　2、選擇形狀穩(wěn)定的細(xì)胞。

　　3、選擇活力無(wú)損的細(xì)胞。

　　總的來(lái)說(shuō)，穩(wěn)定細(xì)胞株不僅能降低成本，能夠減少污染，而且能夠有效地避免一些認(rèn)為原因造成的影響，提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確度。雖然說(shuō)現(xiàn)階段的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建有著一定的局限性，但是，相信技術(shù)的發(fā)展下，未來(lái)一定能夠解決這些問(wèn)題。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。

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