重組蛋白表達(dá)時(shí)細(xì)胞轉(zhuǎn)染中的一些注意事項(xiàng)

　　在進(jìn)行重組蛋白表達(dá)時(shí)，需要通過一定的技術(shù)手段將目的基因置入到宿主細(xì)胞內(nèi)，這個(gè)過程我們稱之為細(xì)胞轉(zhuǎn)染。前文中我們和大家介紹過細(xì)胞轉(zhuǎn)染的一些方法，比如物理介導(dǎo)法、生物介導(dǎo)法等(詳情可查看“什么是細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)?盤點(diǎn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理及其的特點(diǎn)”)?？梢哉f，細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功與否直接關(guān)系到重組蛋白表達(dá)的成功。那么，細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)有哪些因素會(huì)影響到因素呢?

　　1、血清

　　血清會(huì)在一定程度上影響到蛋白的表達(dá)，比如DNA陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)是不能包含血清的，而且血清也曾一度被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)，對(duì)于那些對(duì)血清含量比較敏感的細(xì)胞，會(huì)在極大程度上影響到蛋白的表達(dá);

　　2、抗生素

　　抗生素(青霉素、鏈霉素等)會(huì)在一定程度上影響到細(xì)胞轉(zhuǎn)染，有一些細(xì)胞會(huì)受到抗生素的影響，需要結(jié)合具體情況來選擇是否添加抗生素;

　　3、細(xì)胞狀態(tài)

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染的過程非常重要，一定不要急于求成，需要讓細(xì)胞保持在最佳狀態(tài)時(shí)再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。一般來說，除了細(xì)胞狀態(tài)外，還需要盡量保證不要用傳代太多次的細(xì)胞去做;

　　4、細(xì)胞鋪板密度

　　不同的細(xì)胞其最佳培養(yǎng)密度是各不相同的，需要結(jié)合細(xì)胞的類型以及應(yīng)用而異;

　　5、啟動(dòng)子選擇

　　想要獲得高轉(zhuǎn)染的活性細(xì)胞，和其所選擇的啟動(dòng)子相關(guān)性是非常高的。比如，CMV啟動(dòng)子在大多數(shù)細(xì)胞類型中可以獲得較高表達(dá)活性;

　　6、DNA量

　　高質(zhì)量的DNA量對(duì)于高效表達(dá)可以說是至關(guān)重要的，轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒無論是在純度還是在濃度方面都有著很高的需求;

　　總的來說，影響到細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素是非常多的，都需要結(jié)合實(shí)際情況來進(jìn)行選擇。所以，我們除了按照實(shí)驗(yàn)順序進(jìn)行轉(zhuǎn)染，同時(shí)調(diào)整好相應(yīng)的轉(zhuǎn)染環(huán)境外，還需要主要好相應(yīng)的細(xì)節(jié)問題。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。