盤點在重組蛋白表達和純化過程中會遇到的問題

　　重組蛋白表達過程中，合適的技術(shù)路線會讓整個實驗過程事半功倍，雖然說，經(jīng)過多年的發(fā)展，技術(shù)已經(jīng)非常成熟了，但是，這也是一個非常依賴經(jīng)驗的技術(shù)。所以，對于一些新手來說，在重組蛋白表達過程中，有很多需要注意的問題。有鑒于此，普健生物在這里和大家具體聊聊有關(guān)重組蛋白表達和純化過程中常常會遇到的問題。

　　1、蛋白不表達

　　蛋白不表達的原因有很多，一般來說，大部分的都可以通過如下幾個方面來判斷。蛋白大?。阂话銇碚f，小于10kd或大于100kd的蛋白都是比較難以表達的;表達菌株與質(zhì)粒是否配套;表達條件是否合適，比如誘導(dǎo)劑、溫度等;培養(yǎng)基選擇：對于不同的表達需求，需要搭配不同的培養(yǎng)基選擇;當(dāng)然了，表達成功與否也和表達量太低或是降解太快有關(guān);

　　2、蛋白降解

　　在純化過程中，常常會因為蛋白降解而導(dǎo)致表達失敗。一般是因為細(xì)菌本身的蛋白酶所有引起的，所以，需要全程添加蛋白酶抑制劑;

　　3、蛋白純度不高

　　蛋白純化過程時并不是每次都完美洗去雜質(zhì)，特別是鎳柱純化，雜蛋白較多，需要結(jié)合多種純化方式聯(lián)用;

　　4、條帶與預(yù)測不符

　　蛋白表達后常常會以多種狀態(tài)存在，因為電荷分布，會導(dǎo)致遷移速率有一定的變化，所以，會造成條帶偏移，復(fù)性后的蛋白會存在著大小偏移的現(xiàn)象，而且翻譯后修飾也會造成條帶大小不一;

　　當(dāng)然了，重組蛋白表達過程中會遇到的問題有很多，無論是誘導(dǎo)溫度、濕度等方面的影響，以及各種抑制劑的添加，控制好細(xì)節(jié)方面的問題才能保證蛋白的表達。在研究過程中遇到問題，需要進行大量的排查、試錯，這樣才能在面對一個全新蛋白時，更好地進行控制。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。