重組蛋白純化后為什么會(huì)出現(xiàn)沉淀的情況?該如何解決?

　　在我們進(jìn)行重組蛋白表達(dá)時(shí)，很多時(shí)候沒(méi)辦法一次性成功，往往會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題。比如，重組蛋白純化后沉淀的情況，一般來(lái)說(shuō)，蛋白都會(huì)懸浮在溶液中，為什么會(huì)出現(xiàn)沉淀的情況呢?今天普健生物就蛋白純化后沉淀的現(xiàn)象和大家具體分析分析。

　　其實(shí)就發(fā)生情況來(lái)說(shuō)，在鎳離子親和純化蛋白時(shí)，蛋白沉淀的現(xiàn)象發(fā)生最多，主要原因如下：

　　1、在純化過(guò)程中出現(xiàn)鎳離子脫落的情況，而鎳離子屬于重金屬，其會(huì)造成蛋白凝聚后沉淀的情況;

　　2、制備的溶液不符合蛋白的特性。換句話說(shuō)，我們配置的溶液不達(dá)標(biāo)，使得蛋白無(wú)法更好地溶解于溶液中，自然會(huì)析出;

　　3、還是溶液的環(huán)境影響，所配置的溶液的PH值里蛋白的等電點(diǎn)太過(guò)接近，一般這個(gè)時(shí)候的蛋白都比較容易出現(xiàn)沉淀情況;

　　4、溫度因素。在4度的環(huán)境下，蛋白溶液容易滋生細(xì)菌等微生物，長(zhǎng)時(shí)間可能會(huì)造成蛋白性質(zhì)變化或降解，最終造成沉淀;

　　5、反復(fù)凍融。多次對(duì)半百進(jìn)行冰凍和融化會(huì)造成蛋白結(jié)構(gòu)的傷害，造成蛋白不溶;

　　當(dāng)然了，重組蛋白出現(xiàn)沉淀的情況，并不是說(shuō)蛋白就失去活性了，通過(guò)一定的手段，可以讓蛋白重新溶解并使用。那么，如何解決蛋白沉淀的情況呢?

　　1、在使用鎳柱純化蛋白的時(shí)候，適當(dāng)加入一些EDTA，通過(guò)其消除脫落下來(lái)的鎳離子，從而減少其對(duì)蛋白的上傷害;

　　2、加入分散劑，減少蛋白分子之間的碰撞;

　　3、加入蛋白保護(hù)劑，防止蛋白的降解;

　　4、計(jì)算出蛋白的等電點(diǎn)，然后在配置溶液的時(shí)候，盡量避開(kāi)這個(gè)等電點(diǎn);

　　5、控制好溫度，避免蛋白的熱損;

　　6、對(duì)于那些難以單獨(dú)純?cè)诘牡鞍?，可以添加一些輔助蛋白，讓其維持在一個(gè)很好的構(gòu)象內(nèi);

　　7、特殊情況特殊對(duì)待，針對(duì)不同的蛋白，使用不同的保存方法;

　　總的來(lái)說(shuō)，我們?cè)谶M(jìn)行重組蛋白制備的時(shí)候，不僅要做好相應(yīng)的制備方案，蛋白的保存方案也需要做好，這樣才能為客戶(hù)提供更好的蛋白產(chǎn)品。盎然了，隨著更多新型蛋白的出現(xiàn)，其發(fā)生沉淀的原因也會(huì)越來(lái)越多，我們需要根據(jù)蛋白的特性，調(diào)整相應(yīng)的防沉淀措施。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供重組蛋白制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。