盤點(diǎn)重組蛋白表達(dá)過程中常見的幾個(gè)問題

　　在重組蛋白表達(dá)中，很多時(shí)候會(huì)出現(xiàn)因?yàn)橐恍┰蚧蚴钦`操作導(dǎo)致蛋白表達(dá)失敗或蛋白性能達(dá)不到要求的情況。很多時(shí)候是因?yàn)橐恍┘?xì)節(jié)操作方面的問題，有些時(shí)候是因?yàn)橹亟M蛋白設(shè)計(jì)方面的問題，那么，到底是因?yàn)槭裁丛驅(qū)е履?有鑒于此，普健生物今天在這里和大家具體盤點(diǎn)一下有關(guān)重組蛋白表達(dá)過程中的一些常見問題。

　　1、蛋白表達(dá)水平低

　　重組蛋白表達(dá)水平低可以說是重組蛋白系列中最常見的一個(gè)問題，因?yàn)榈鞍兹藶楦深A(yù)程度較高，無法完全按照傳統(tǒng)蛋白表達(dá)條件進(jìn)行表達(dá)。引起這個(gè)情況的原因很多，比如啟動(dòng)子活性不足、轉(zhuǎn)錄過程阻塞、翻譯后修飾限制多等等。需要通過優(yōu)化啟動(dòng)子、培養(yǎng)條件、轉(zhuǎn)化條件、培養(yǎng)時(shí)間等多方面進(jìn)行綜合考慮;

　　2、目的蛋白形成包涵體

　　非天然蛋白會(huì)出現(xiàn)包涵體的情況也是重組蛋白表達(dá)過程中非常常見的問題。當(dāng)形成包涵體時(shí)，我們可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件、引入輔助蛋白等方式來解決這個(gè)問題;

　　3、目標(biāo)蛋白磷酸化或糖基化不足

　　重組蛋白在表達(dá)后常常需要對其進(jìn)行翻譯后修飾的操作(比如糖基化和磷酸化)，但是有的時(shí)候因?yàn)樾揎棾潭炔蛔?，?dǎo)致蛋白在功能和穩(wěn)定性方面受到影響。我們可以通過優(yōu)化培養(yǎng)條件、引入合適的修飾基因以及選擇更好的進(jìn)化系統(tǒng)來解決問題;

　　4、目標(biāo)蛋白折疊和穩(wěn)定性方面的問題

　　目的蛋白折疊錯(cuò)誤很容易出現(xiàn)蛋白失活或不穩(wěn)定的現(xiàn)象，這個(gè)時(shí)候我們需要優(yōu)化載體構(gòu)建以及純化策略的方式來解決問題;

　　5、目標(biāo)蛋白可溶性問題

　　蛋白不可溶或可溶性低也是重組蛋白表達(dá)的常見問題，主要表現(xiàn)在保存時(shí)出現(xiàn)聚集和結(jié)晶方面的問題。我們可以通過優(yōu)化純化條件、使用功能蛋白穩(wěn)定劑以及使蛋白緩慢結(jié)晶的方式來解決這個(gè)問題;

　　重組蛋白表達(dá)在蛋白功能研究和醫(yī)藥生產(chǎn)方面有著重要的意義，但是也因?yàn)槠浞翘烊坏鞍椎木壒?，?huì)遇到很多傳統(tǒng)蛋白表達(dá)所不會(huì)遇到的問題，哺乳表達(dá)量低、包涵體形成等。這個(gè)時(shí)候，我們就需要通過優(yōu)化各種條件來滿足其表達(dá)的條件，這樣才能獲得質(zhì)量更好的蛋白。當(dāng)然了，各個(gè)細(xì)節(jié)方面的操作也是非常重要的。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。