盤點(diǎn)蛋白表達(dá)過程中的一些影響因素及規(guī)避方法

　　在蛋白表達(dá)過程中，常常會(huì)遇到這樣或那樣的問題，這些問題會(huì)在極大程度上影響到蛋白表達(dá)的結(jié)果。無(wú)論是五大表達(dá)系統(tǒng)中的哪種，總會(huì)在操作過程中出現(xiàn)問題。那么，蛋白表達(dá)過程中會(huì)遇到哪些問題?如何規(guī)避這些問題呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。

　　1、載體構(gòu)建錯(cuò)誤

　　其實(shí)這是一個(gè)新人常常會(huì)犯的錯(cuò)誤，在克隆時(shí)弄錯(cuò)讀碼框，導(dǎo)致蛋白無(wú)法表達(dá)。所以，在構(gòu)建載體的時(shí)候，需要考慮好啟動(dòng)子、多克隆抗體位點(diǎn)終止子等等各方面的因素;

　　2、宿主菌選擇不當(dāng)

　　對(duì)于不同的宿主菌來說，其表達(dá)表達(dá)載體是各不相同的，對(duì)于一些特殊的載體來說，甚至無(wú)法表達(dá)。一般在蛋白表達(dá)時(shí)，需要選擇合適的載體;

　　3、密碼子優(yōu)化

　　對(duì)密碼子進(jìn)行優(yōu)化，比如研究密碼子的偏愛性以及密碼子的使用頻率，對(duì)密碼子進(jìn)行優(yōu)化;

　　3、mRNA的穩(wěn)定性

　　mRNA的穩(wěn)定性直接影響到轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平，甚至對(duì)于那些擁有稀有密碼子的mRNA來說，可能造成其表達(dá)問題;

　　4、基因突變

　　堿基的缺失、插入或突變都有可能造成蛋白的翻譯問題，所以，在進(jìn)行表達(dá)前，一定要通過測(cè)序來避免這種情況的發(fā)生;

　　操作過程中，有哪些問題可以規(guī)避掉?

　　1、可溶蛋白如何獲取?

　　可以選擇表達(dá)量不高的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，或者是選這有助于可溶性表達(dá)的融合蛋白表達(dá)系統(tǒng);

　　2、什么溫度使得蛋白溶解度更大?

　　據(jù)統(tǒng)計(jì)，在37度環(huán)境下制備的蛋白容易生成包涵體，而30度環(huán)境下容易產(chǎn)生可溶性和活性都高的蛋白。當(dāng)然了，對(duì)于一些特殊的蛋白來說，15-20度的環(huán)境下蛋白產(chǎn)量最大;

　　3、包涵體、內(nèi)毒素如何規(guī)避?

　　選擇合適的蛋白表達(dá)系統(tǒng)即可，一般來說，在環(huán)境配置合適的情況下，就能更好地規(guī)避包涵體和內(nèi)毒素的形成;

　　總的來說，在蛋白表達(dá)的過程中，我們需要面對(duì)的問題有很多，一些細(xì)節(jié)方面的問題也更需要引起注意。所以，我們選擇好合適的表達(dá)系統(tǒng)，配置好相應(yīng)的環(huán)境，并做好包涵體和內(nèi)毒素的規(guī)避，這樣就能獲得更加合適的蛋白產(chǎn)品。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。