盤(pán)點(diǎn)質(zhì)粒提取過(guò)程中的一些常見(jiàn)問(wèn)題

　　質(zhì)粒廣泛存在于生物界，是易總存在于染色體意外的DNA分子，具備自主復(fù)制能力。在日常蛋白制備過(guò)程中，我們常常通過(guò)基因技術(shù)對(duì)質(zhì)?；蛐畔⑦M(jìn)行修改，從而制備我們所需的蛋白。但是在制備過(guò)程中，會(huì)遇到很多問(wèn)題，導(dǎo)致蛋白制備失敗。有鑒于此，普健生物和您具體聊聊有關(guān)質(zhì)粒提取過(guò)程中的一些常見(jiàn)問(wèn)題。

　　1、時(shí)間控制方面的問(wèn)題

　　對(duì)于裂解來(lái)說(shuō)，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般來(lái)說(shuō)，不要超過(guò)5分鐘。吸附時(shí)間不夠，或者溶解時(shí)間不夠，都會(huì)造成質(zhì)粒DNA提取失敗;

　　2、大腸桿菌老化

　　大腸桿菌頻繁使用會(huì)導(dǎo)致其老化的現(xiàn)象，所以，在進(jìn)行大腸桿菌培養(yǎng)時(shí)，需要重新挑選菌落進(jìn)行培養(yǎng);

　　3、質(zhì)粒復(fù)制數(shù)量過(guò)低

　　所選質(zhì)粒拷貝數(shù)過(guò)低，會(huì)在很大程度上早場(chǎng)質(zhì)粒DNA提取量低的情況，在實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要盡可能挑選高拷貝數(shù)的載體;

　　4、配置的溶液使用不當(dāng)

　　溶液溫度過(guò)低時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)渾濁的情況，之后保持在37度的環(huán)境下，才能保證溶液清亮;

　　5、吸附柱過(guò)載

　　對(duì)于不同的產(chǎn)品來(lái)說(shuō)，吸附柱的吸附能力是各不相同的，如果提取的質(zhì)粒數(shù)量較大，需要進(jìn)行多次提取;

　　6、質(zhì)粒未能全部溶解

　　洗脫質(zhì)粒的時(shí)候，需要適當(dāng)對(duì)其進(jìn)行加溫或延長(zhǎng)溶解時(shí)間;

　　7、洗脫液加入的位置不對(duì)

　　洗脫液需要在硅膠膜的中間位置加入，這樣才能保證其達(dá)到最大洗脫率;

　　8、過(guò)多的乙醇?xì)埩?/p>

　　在我們選擇漂洗液進(jìn)行洗滌后，需要盡可能地去除殘留的液體，以避免殘留的乙醇對(duì)后期的實(shí)驗(yàn)造成影響;

　　9、洗脫液的體積過(guò)小

　　洗脫體積對(duì)回收率會(huì)造成一定的影響，過(guò)高的洗脫體積會(huì)造成產(chǎn)品濃度過(guò)低的情況;

　　雖然說(shuō)質(zhì)粒提取能夠在很大程度上降低目的蛋白制備的操作步驟，但是，操作過(guò)程中也有很多需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題，需要在制備過(guò)程中多注意。當(dāng)然了，對(duì)于大部分的公司來(lái)說(shuō)，這個(gè)過(guò)程基本上都不成問(wèn)題。普健生物為您提供專業(yè)的蛋白制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。